Galectin-8 Enhances T cell Response by Promotion of Antigen Internalization and Processing

Galectin-8 (Gal-8) is a mammalian lectin endowed with immunostimulatory ability. In the present work, we demonstrate that Gal-8-glycan interactions on the surface of antigen-presenting cells (APCs) promote antigen binding and internalization, independently from antigen nature. Both Gal-8 and antigen were together internalized and localized in early endosomes. Interestingly, antigen processing by APCs was also accelerated in the presence of Gal-8 as a separate mechanism, distinct from the increased antigen internalization. Moreover, APCs pulsed together with antigen and Gal-8 were able to activate cognate CD4+ T cells more efficiently than those pulsed with antigen alone. This enhanced antigen presentation was still evident in the absence of costimulatory signals and APCs-derived soluble mediators. Therefore, our results provide evidence for as yet unrecognized mechanism by which Gal-8 stimulates the elicitation of the immune response in a lectin-dependent manner, by inducing antigen uptake and processing upon lattice formation at APCs surface.Fil: Prato, Cecilia Arahi. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Carabelli, Julieta. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Campetella, Oscar Eduardo. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Tribulatti, María Virginia. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; Argentin

Galectin-8 in the onset of the immune response and inflammation

Galectins (Gals), a family of mammalian lectins, have emerged as key regulators of the immune response, being implicated in several physiologic and pathologic conditions. Lately, there is increasing data regarding the participation of Galectin-8 (Gal-8) in both the adaptive and innate immune responses, as well as its high expression in inflammatory disorders. Here, we focus on the pro- and anti-inflammatory properties of Gal-8 and discuss the potential use of this lectin in order to shape the immune response, according to the context.Fil: Tribulatti, María Virginia. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Carabelli, Julieta. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Prato, Cecilia Arahi. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Campetella, Oscar Eduardo. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; Argentin

Inactive trans-sialidase expression in iTS-null Trypanosoma cruzi generates virulent trypomastigotes

Disclosing virulence factors from pathogens is required to better understand the pathogenic mechanisms involved in their interaction with the host. In the case of Trypanosoma cruzi several molecules are associated with virulence. Among them, the trans-sialidase (TS) has arisen as one of particular relevance due to its effect on the immune system and involvement in the interaction/invasion of the host cells. The presence of conserved genes encoding for an inactive TS (iTS) isoform is puzzlingly restricted to the genome of parasites from the Discrete Typing Units TcII, TcV, and TcVI, which include highly virulent strains. Previous in vitro results using recombinant iTS support that this isoform could play a different or complementary pathogenic role to that of the enzymatically active protein. However, direct evidence involving iTS in in vivo pathogenesis and invasion is still lacking. Here we faced this challenge by transfecting iTS-null parasites with a recombinant gene that allowed us to follow its expression and association with pathological events. We found that iTS expression improves parasite invasion of host cells and increases their in vivo virulence for mice as shown by histopathologic findings in heart and skeletal muscle.Fil: Pascuale, Carla Antonela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Burgos, Juan Miguel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Postan, Miriam. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”. Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben”; ArgentinaFil: Lantos, Andrés Bernardo Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Bertelli, Adriano. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Campetella, Oscar Eduardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Leguizamon, Maria Susana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; Argentin

Purification of Recombinant Galectins Expressed in Bacteria

Galectins are soluble lectins that participate in many physiological and pathological functions. Since they can act extracellularly, the use of the recombinant protein is a recurrent strategy for studying their biological functions. Here, we provide a general protocol for the production of Galectins and their isolated or chimeric domains. We take advantage of their lectin activity and the 6xHis-tag addition for purification, thus obtaining a highly pure and active Galectin to use in both in vitro and in vivo assays. For complete details on the use and execution of this protocol, please refer to Cattaneo et al. (2011), Tribulatti et al. (2012), and Prato et al. (2020).Fil: Prato, Cecilia Arahi. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Carabelli, Julieta. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Cattaneo, Valentina. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Campetella, Oscar Eduardo. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Tribulatti, María Virginia. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; Argentin

Trypanosoma cruzi Induces B Cells That Regulate the CD4+ T Cell Response

Trypanosoma cruzi infection induces a polyclonal B cell proliferative response characterized by maturation to plasma cells, excessive generation of germinal centers, and secretion of parasite-unrelated antibodies. Although traditionally reduced to the humoral response, several infectious and non-infectious models revealed that B lymphocytes could regulate and play crucial roles in cellular responses. Here, we analyze the trypomastigote-induced effect on B cells, their effects on CD4+ T cells, and their correlation with in vivo findings. The trypomastigotes were able to induce the proliferation and the production of IL-10 or IL-6 of naïve B cells in co-culture experiments. Also, we found that IL-10-producing B220lo cells were elicited in vivo. We also found up-regulated expression of FasL and PD-L1, proteins involved in apoptosis induction and inhibition of TCR signaling, and of BAFF and APRIL mRNAs, two B-cell growth factors. Interestingly, it was observed that IL-21, which plays a critical role in regulatory B cell differentiation, was significantly increased in B220+/IL-21+ in in vivo infections. This is striking since the secretion of IL-21 is associated with T helper follicular cells. Furthermore, trypomastigote-stimulated B-cell conditioned medium dramatically reduced the proliferation and increased the apoptotic rate on CD3/CD28 activated CD4+ T cells, suggesting the development of effective regulatory B cells. In this condition, CD4+ T cells showed a marked decrease in proliferation and viability with marginal IL-2 or IFNγ secretion, which is counterproductive with an efficient immune response against T. cruzi. Altogether, our results show that B lymphocytes stimulated with trypomastigotes adopt a particular phenotype that exerts a strong regulation of this T cell compartment by inducing apoptosis, arresting cell division, and affecting the developing of a proinflammatory response.Fil: Somoza, Martín. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Bertelli, Adriano. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Pratto, Cecilia A.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Verdun, Ramiro E.. University of Miami; Estados UnidosFil: Campetella, Oscar Eduardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Mucci, Juan Sebastián. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; Argentin

Interleukin-6 signalling mediates Galectin-8 co-stimulatory activity of antigen-specific CD4 T-cell response

Galectin-8 (Gal-8) is a mammalian lectin endowed with the ability to co-stimulate antigen-specific immune responses. We have previously demonstrated that bone-marrow-derived dendritic cells produce high levels of interleukin-6 (IL-6) in response to Gal-8 stimulation. As IL-6 is a pleiotropic cytokine that has a broad effect on cells of the immune system, we aimed to elucidate whether IL-6 was involved in Gal-8-dependent co-stimulatory signals during antigen recognition by specific CD4 T cells. With this aim, splenocytes from DO11.10 mice were incubated with a low dose of the cognate ovalbumin peptide in combination with Gal-8. Interleukin-6 was found significantly increased in cultures stimulated with Gal-8 alone or Gal-8 plus cognate peptide. Moreover, IL-6 signalling was triggered during Gal-8-induced co-stimulation, as determined by phosphorylation of signal transducer and activator of transcription 3. Interleukin-6 blockade by neutralizing monoclonal antibody precluded Gal-8 co-stimulatory activity but did not affect the antigen-specific T-cell receptor activation. Different subsets of dendritic cells, as well as macrophages and B cells, were identified as the cellular source of IL-6 during Gal-8-induced co-stimulation. To confirm that IL-6 mediated the Gal-8 co-stimulatory effect, antigen-presenting cells from IL-6-deficient or wild-type mice were co-cultured with purified CD4 T cells from OTII mice in the presence of cognate peptide and Gal-8. Notably, Gal-8-induced co-stimulation, but not the antigen-specific response, was significantly impaired in the presence of IL-SL-6 signalling mediates the Gal-8 immune-stimulatory effect.Fil: Carabelli, Julieta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Prato, Cecilia Arahi. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Sanmarco, Liliana Maria. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Aoki, Maria del Pilar. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Campetella, Oscar Eduardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Tribulatti, María Virginia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; Argentin

Human platelets express and are activated by galectin-8

Gals (galectins) are proteins with glycan affinity that are emerging as mediators of atherosclerosis. Despite the similarities in structure and sequence, different Gals exert distinct effects on their target cells. We have shown that Gal-1 triggers platelet activation, suggesting a role for Gals in thrombus formation. Since Gal-8 is expressed upon endothelial activation and also contributes to inflammation, to understand further the role of these lectins in haemostasis, we evaluated the effect of Gal-8 on human platelets. Gal-8 bound specific glycans in the platelet membrane and triggered spreading, calcium mobilization and fibrinogen binding. It also promoted aggregation, thromboxane generation, P-selectin expression and granule secretion. GP (glycoprotein) αIIb and Ib-V were identified as putative Gal-8 counter-receptors by MS. Studies performed using platelets from Glanzmann?s thromboasthenia and Bernard?Soulier syndrome patients confirmed that GPIb is essential for transducing Gal-8 signalling. Accordingly, Src, PLC2γ (phospholipase C2γ ), ERK (extracellular-signal- regulated kinase) and PI3K (phosphoinositide 3-kinase)/Akt downstream molecules were involved in the Gal-8 signalling pathway. Gal-8 fragments containing either the N- or C-terminal carbohydrate-recognition domains showed that activation is exerted through the N-terminus. Western blotting and cytometry showed that platelets not only contain Gal-8, but also expose Gal- 8 after thrombin activation. These findings reveal Gal-8 as a potent platelet activator, supporting a role for this lectin in thrombosis and inflammation.Fil: Romaniuk, María Albertina. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Investigaciones Hematológicas "Mariano R. Castex"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Tribulatti, María Virginia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Dr. Raúl Alfonsín" (sede Chascomús). Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Dr. Raúl Alfonsín" (sede Chascomús); ArgentinaFil: Cattaneo, Valentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Dr. Raúl Alfonsín" (sede Chascomús). Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Dr. Raúl Alfonsín" (sede Chascomús); ArgentinaFil: Lapponi, María José. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Investigaciones Hematológicas "Mariano R. Castex"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Molinas, Felisa Concepción. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Campetella, Oscar Eduardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Dr. Raúl Alfonsín" (sede Chascomús). Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Dr. Raúl Alfonsín" (sede Chascomús); ArgentinaFil: Schattner, Mirta Ana. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Investigaciones Hematológicas "Mariano R. Castex"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Sialic acid removal by trans-sialidase modulates MMP-2 activity during Trypanosoma cruzi infection

Matrix metalloproteinases (MMPs) not only play a relevant role in homeostatic processes but are also involved in several pathological mechanisms associated with infectious diseases. As their clinical relevance in Chagas disease has recently been highlighted, we studied the modulation of circulating MMPs by Trypanosoma cruzi infection. We found that virulent parasites from Discrete Typing Units (DTU) VI induced higher proMMP-2 and MMP-2 activity in blood, whereas both low (DTU I) and high virulence parasites induced a significant decrease in proMMP-9 plasma activity. Moreover, trans-sialidase, a relevant T. cruzi virulence factor, is involved in MMP-2 activity modulation both in vivo and in vitro. It removes α2,3-linked sialyl residues from cell surface glycoconjugates, which then triggers the PKC/MEK/ERK signaling pathway. Additionally, bacterial sialidases specific for this sialyl residue linkage displayed similar MMP modulation profiles and triggered the same signaling pathways. This novel pathogenic mechanism, dependent on sialic acid removal by the neuraminidase activity of trans-sialidase, can be exploited by different pathogens expressing sialidases with similar specificity. Thus, here we present a new pathogen strategy through the regulation of the MMP network.Fil: Musikant, Alejandro Daniel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; ArgentinaFil: Higa, Romina Daniela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; ArgentinaFil: Rodríguez, Cristina Elisa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica; ArgentinaFil: Edreira, Martin Miguel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Campetella, Oscar Eduardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Jawerbaum, Alicia Sandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; ArgentinaFil: Leguizamon, Maria Susana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; Argentin

Molecular and antigenic characterization of Trypanosoma cruzi TolT proteins

Background: TolT was originally described as a Trypanosoma cruzi molecule that accumulated on the trypomastigote flagellum bearing similarity to bacterial TolA colicins receptors. Preliminary biochemical studies indicated that TolT resolved in SDS-PAGE as ~3–5 different bands with sizes between 34 and 45 kDa, and that this heterogeneity could be ascribed to differences in polypeptide glycosylation. However, the recurrent identification of TolT-deduced peptides, and variations thereof, in trypomastigote proteomic surveys suggested an intrinsic TolT complexity, and prompted us to undertake a thorough reassessment of this antigen. Methods/Principle findings: Genome mining exercises showed that TolT constitutes a larger-than-expected family of genes, with at least 12 polymorphic members in the T. cruzi CL Brener reference strain and homologs in different trypanosomes. According to structural features, TolT deduced proteins could be split into three robust groups, termed TolT-A, TolT-B, and TolT-C, all of them showing marginal sequence similarity to bacterial TolA proteins and canonical signatures of surface localization/membrane association, most of which were herein experimentally validated. Further biochemical and microscopy-based characterizations indicated that this grouping may have a functional correlate, as TolT-A, TolT-B and TolT-C molecules showed differences in their expression profile, sub-cellular distribution, post-translational modification(s) and antigenic structure. We finally used a recently developed fluorescence magnetic beads immunoassay to validate a recombinant protein spanning the central and mature region of a TolT-B deduced molecule for Chagas disease serodiagnosis. Conclusion/Significance: This study unveiled an unexpected genetic and biochemical complexity within the TolT family, which could be exploited for the development of novel T. cruzi biomarkers with diagnostic/therapeutic applications.Fil: Lobo, Mabel Maite. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Balouz, Virginia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Melli, Luciano Jorge. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Carlevaro, Giannina Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Cortina, María Eugenia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Camara, María de los Milagros. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Canepa, Gaspar Exequiel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Carmona, Santiago Javier. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Altcheh, Jaime Marcelo. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Campetella, Oscar Eduardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Ciocchini, Andres Eduardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Agüero, Fernan Gonzalo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Mucci, Juan Sebastián. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Buscaglia, Carlos Andres. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; Argentin

Rab11 Regulates Trafficking of Trans-sialidase to the Plasma Membrane through the Contractile Vacuole Complex of Trypanosoma cruzi

Trypanosoma cruzi is the etiologic agent of Chagas disease. Although this is not a free-living organism it has conserved a contractile vacuole complex (CVC) to regulate its osmolarity. This obligate intracellular pathogen is, in addition, dependent on surface proteins to invade its hosts. Here we used a combination of genetic and biochemical approaches to delineate the contribution of the CVC to the traffic of glycosylphosphatidylinositol (GPI)-anchored proteins to the plasma membrane of the parasite and promote host invasion. While T. cruzi Rab11 (GFP-TcRab11) localized to the CVC, a dominant negative (DN) mutant tagged with GFP (GFP-TcRab11DN) localized to the cytosol, and epimastigotes expressing this mutant were less responsive to hyposmotic and hyperosmotic stress. Mutant parasites were still able to differentiate into metacyclic forms and infect host cells. GPI-anchored trans-sialidase (TcTS), mucins of the 60–200 KDa family, and trypomastigote small surface antigen (TcTSSA II) co-localized with GFP-TcRab11 to the CVC during transformation of intracellular amastigotes into trypomastigotes. Mucins of the gp35/50 family also co-localized with the CVC during metacyclogenesis. Parasites expressing GFP-TcRab11DN prevented TcTS, but not other membrane proteins, from reaching the plasma membrane, and were less infective as compared to wild type cells. Incubation of these mutants in the presence of exogenous recombinant active, but not inactive, TcTS, and a sialic acid donor, before infecting host cells, partially rescued infectivity of trypomastigotes. Taking together these results reveal roles of TcRab11 in osmoregulation and trafficking of trans-sialidase to the plasma membrane, the role of trans-sialidase in promoting infection, and a novel unconventional mechanism of GPI-anchored protein secretion.Fil: Niyogi, Sayantanee. University Of Georgia. Department Of Cellular Biology; Estados UnidosFil: Mucci, Juan Sebastián. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de San Martín; ArgentinaFil: Campetella, Oscar Eduardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de San Martín; ArgentinaFil: Docampo, Jorge Raul. University Of Georgia. Department Of Cellular Biology; Estados Unido